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本试剂盒采用高效、专一结合核酸的离心吸附柱和独特的缓冲系统，可从细菌或培养的动物细胞中快速提取总RNA。30～40分钟内即可完成反应，提取的总RNA纯度极高，没有蛋白质和其他污染，适用于RT-PCR、Real-Time RT-PCR、芯片分析、体外翻译等实验。

• 预防RNase污染，应注意以下几方面：
  
  • 使用无RNase的塑料制品和枪头，避免交叉污染。
    
  • 配制溶液应使用无RNase的水。
    
  • 操作人员戴一次性口罩和手套，实验过程中要勤换手套。
• Buffer RL在使用前请加入β-巯基乙醇至终浓度为1%，如1mL Buffer RL加10μL β-巯基乙醇。加入β-巯基乙醇的Buffer RL 4℃可保存1个月，如出现沉淀，请加热溶解后使用。
  
• 第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在Buffer RW2中加入无水乙醇。
  
• 如未特殊说明，所有离心步骤均在室温下进行，且所有操作步骤动作要迅速。

• 4℃ 12000rpm（~13400×g）离心2分钟收集菌体（菌体量最大不超过1×10⁹），小心去除所有上清。
  注意：上清如果有残留，会影响后续的消化过程。
  
• 用含有Lysozyme的100μL TE缓冲液彻底重悬菌体，室温孵育。具体配方和孵育时间如下：
  

  	TE缓冲液中Lysozyme的终浓度	孵育时间
  G-细菌	400μg/mL	3～5分钟
  G+细菌	3mg/mL	5～10分钟

• 加入350μL Buffer RL（使用前请检查是否加入β-巯基乙醇），涡旋震荡混匀（此步骤可能出现不溶性沉淀），将溶液与沉淀全部加入到已装入收集管的过滤柱FL中，12000rpm离心2分钟。
  
• 向上步得到的滤液中加入250μL无水乙醇，混匀（此时可能会出现沉淀）。将得到的溶液和沉淀一起转入已装入收集管的吸附柱RM中，12000rpm离心1分钟，弃掉废液，将吸附柱重新放回收集管中。
  
• 向吸附柱中加入350μL Buffer RW1，12000rpm离心1分钟，弃废液，将吸附柱重新放回收集管中。
  
• 配制DNase I混合液：取52μL RNase-Free Water，向其中加入8μL 10×Reaction Buffer和20μL DNase I(1U/μL)，混匀，配制成终体积为80μL的反应液。
  
• 向吸附柱中直接加入80μL DNase I混合液，20～30℃孵育15分钟。
  
• 向吸附柱中加入350μL Buffer RW1，12000rpm离心1分钟，弃废液，将吸附柱重新放回收集管中。
  
• 向吸附柱中加入500μL Buffer RW2（使用前检查是否加入无水乙醇）,12000rpm离心1分钟，弃废液。
  
• 重复步骤9。
  
• 将吸附柱放回收集管中，12000rpm离心2分钟。
  注意：这一步的目的是将吸附柱中残余乙醇去除，乙醇残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。
  
• 将吸附柱装入新的RNase-Free的收集管中，向吸附膜的中间加入30～50μL RNase-Free Water，室温放置1分钟，12000rpm离心1分钟，收集RNA溶液，-70℃保存RNA，防止降解。
  注意：
  
  • RNase-Free Water体积不应小于30μL，体积过小影响回收率。
    
  • 如果要提高RNA的产量，可用30～50μL新的RNase-Free Water重复步骤12。
    
  • 如果要提高RNA浓度，可将得到的溶液重新加入到吸附柱中，重复步骤12。